第453章 都是基本操作大家先坐下(1 / 15)
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不是可能存在,而是一定存在。
因为制备样本中的rRNA占到了总RNA的80%以上。
这样在测序时,准确性必然会受到无可估计的影响。
“梅林,你的担心是正确的。”陆时羡给予他认可的眼神道:“因此我们必须通过RNA富集的方法去除rRNA的干扰。”
说到这里,就算几人再迟钝脑中也迅速想起一个字眼。
“oligo-dT富集法?”
“没错。”陆时羡打了个响指:“虽然剔除rRNA后进行WTA也有人使用,但在学界里,由于样本质量的高效性,一般都适用oligo-dT对poly(A)RNA进行富集。”
“rRNA剔除法较之于oligo-dT富集的缺陷是要求更高的测序深度,不然样本的rRNA依然会存在一定的数量,富集效果并没有达到想要的程度。”
这话说的已经非常直白了,以至于后面的操作流程都无需继续强调了。
不过陆时羡还是非常认真地继续着接下来地进行操作。
然后,才终于来到了最后的测序环节......
这就是会议上曼伦教授要求陆时羡小组所做的全部工作。
看似只有两个字,但需要完成的工作实则非常繁琐和细致。
三人接下来停止了手里的工作,围站在陆时羡周围看着他操作。
俗话说外行人看热闹,内行人看门道。
别人可能看的一头雾水,但他们还不至于连操作的内容都看不懂。
对RNA进行片段化及纯化操作。
对片段化RNA的产量及片段大小分布进行分析。
对A进行反转录、纯化以及扩增,选择适宜的片段大小建立扩增文库。
对扩增后DNA产量及片段大小的分布进行分析。
而此时的鲍勃简直惊呆了,一旁的梅林和瑟琳也有些震撼。
因为操作到这一步,也就是他们三人之前一直在练习熟练的环节。